皮肤受刺激后会出现灼热、潮红、刺痛、瘙痒等，伴或不伴持续性红斑，个体的遗传、年龄、环境影响等因素均是造成皮肤敏感的常见诱因。皮肤问题的普遍加重，敏感肌肤人群增多，其症状严重影响生活质量，也在化妆品和皮肤医学领域引起关注。壳聚糖（chitosan），又叫壳多糖、脱乙酰甲壳素、几丁聚糖等，是甲壳素脱乙酰化的产物，广泛存在于蟹、虾等甲壳动物的外壳，软体动物的骨骼和外壳以及蘑菇、菌类等的细胞壁中。壳聚糖及其衍生物在化妆品中具有良好的保湿、防紫外线、成膜性、抗衰老、抗氧化等特性。在医药领域，壳聚糖具有止血、抗菌、抗炎等功能，在皮肤创面的修复和再生方面发挥了重要作用。此外，壳聚糖还可对酪氨酸酶及黑色素产生抑制作用，进而实现美白功效，在化妆品领域有着广泛的应用前景。研究表明，壳聚糖能促进创面的修复，减少伤口细菌数量，有利于抑制炎症反应，可逐步缓解炎症带来敏感性皮肤症状。壳聚糖目前广泛应用于医用敷料及护肤品领域，但市面上绝大多数都是虾蟹壳来源的壳聚糖，由于虾蛋白原肌球蛋白的存在，使壳聚糖的生物医学用途受到限制，这可能会在高度敏感的人群中引起过敏反应，因此使用场景有限。以灵芝源壳聚糖为核心展开对肌肤舒缓及修护功效的探索。结合体外试验和人体试验，对灵芝源壳聚糖的抗炎、舒缓、修护功效进行研究，并初步探讨其作用机理。

1.灵芝源壳聚糖对炎症因子的影响

TNF-α 是在肿瘤炎症微环境中发现的一种炎性细胞因子，主要由单核/巨细胞分泌，可以启动慢性炎症反应。TNF- α 通过激活核转录因子κB（NF-κB） 和活化蛋白1 （AP-1） 2 种炎症信号通路调节炎症反应，是重要的炎症因子，并参与某些自身免疫疾病的病理损伤。如图1 所示，测试组（灵芝源壳聚糖给药质量分数1.56%） 的细胞相对活力值为96.18%，无细胞毒性。灵芝源壳聚糖在质量分数1.56%下时，炎症因子TNF-α 含量显著下降，抑制率为35.51%。说明灵芝源壳聚糖具有抑制炎症因子TNF-α 表达的作用，可以预防或缓解皮肤炎症的发生，从而达到舒缓功效。

2.灵芝源壳聚糖对人成纤维细胞的影响

         人成纤维细胞（human fibroblast，HFB） 是组成皮肤真皮层的重要细胞，其增殖和迁移能刺激新的细胞外基质生成并促进伤口的愈合，在皮肤创面愈合中起到重要的修复作用，影响着人体细胞自我修护能力。试验通过细胞划痕测试受试样对人成纤维细胞迁移运动与修护能力。如图2 所示，测试组（灵芝源壳聚糖给药质量分数为3.13%） 的细胞相对活力值为97.56%，无细胞毒性。与BC 组相比，PC 组24 h 细胞平均迁移率极显著增大， 平均迁移率为33.98%，说明阳性对照检测有效。灵芝源壳聚糖在质量分数3.13% 下，24 h 细胞平均迁移率显著增大，平均迁移率为22.06%，认为灵芝源壳聚糖可以通过提高细胞迁移能力对划痕进行愈合，达到修护功效。

3.灵芝源壳聚糖人体皮肤斑贴试验

         人体皮肤斑贴试验的作用是检测受试物是否会给人体皮肤带来潜在的不良反应。这30 例灵芝源壳聚糖人体皮肤斑贴试验结果见表1。试验结果表明，在30 例样本里，阳性对照质量分数0.02%SLS 有3 例呈现1 级反应，且所有受试者均未出现2 级及更高级别的不良反应。这和参考文献的结果大体相同，意味着试验选用的阳性对照含量较为合适，试验结果具有可靠性与真实性。30 例样本中，质量分数0.15%灵芝源壳聚糖测试组出现1 例1 级反应，无任何受试者出现2 级及2 级以上不良反应；质量分数0.1%、0.05%灵芝源壳聚糖测试组所有受试者均未出现1 级及更高级别的不良反应。由此能够得出结论：灵芝源壳聚糖在质量分数0.01% ~ 0.1% 不会对人体皮肤引发不良反应，在此含量范围使用是安全的。依据人体斑贴试验的测试结果，确定选用质量分数0.1%的灵芝源壳聚糖开展后续的人体功效测试。

4.灵芝源壳聚糖的人体功效测试

         ①.皮肤角质层水分含量和TEWL值测试结果

          皮肤角质层含水量和TEWL 值是评估皮肤屏障功能的重要参数，TEWL 值决定于皮肤屏障功能的完整性，当皮肤屏障功能受损时TEWL 值升高。皮肤的保护层越完整，其含水量就越高，TEWL值则越低。在测试0 天时，角质层含水量处于最低水平，TEWL 值最大；在使用含灵芝源壳聚糖的样品14、28 天后，角质层含水量逐步上升，TEWL值逐渐下降。从图3 能够看出，测试组在第28 天后的角质层含水量相较于0 天，其改善率达到43.92%，存在显著统计学差异（P＜0.01）。与空白组相比，测试组在第28天的角质层含水量改善率提升了15.02%。如图3 所示， 测试组第28 天的TEWL 相较于0 天，改善率为13.59%，且测试组与空白组比较，第28天的TEWL改善率增加了9.01%。可以看出，使用含灵芝源壳聚糖的样品可有效提高皮肤含水量、降低TEWL 值，使用的时间越长，效果越明显；说明灵芝源壳聚糖有较好的增加皮肤含水量、降低TEWL值的功效。

         ②.皮肤泛红测试结果

         面部图像分析仪运用光学成像和软件科技进行图像分析，通过偏振光的图片采集技术，可得到皮肤红斑照片，直接反应真皮乳头层的血红色素情况，可用于皮肤红斑、泛红的检测分析。皮肤敏感影响着皮肤泛红情况，皮肤红度（a*） 值和皮肤红区面积占比降低，说明产品对受损皮肤具有舒缓修复功效。测试0 天时a*值和皮肤红区面积占比数值最大，使用含灵芝源壳聚糖的样品14、28 天后，a*值和皮肤红区面积占比数值逐渐降低。如图4 所示，测试组第14 天后a*值与0 天比较，改善率达到了8.59%，具有显著性统计学差异（P＜0.001）。测试组与空白组比较，第14 天a*值改善率增加了6.25%。测试组第28 天皮肤红区面积占比与0 天比较，改善率达到9.99%，测试组与空白组比较，第28天皮肤红区面积占比改善率增加了6.23%。图5 是2 例受试者用灵芝源壳聚糖治疗前、治疗14、28 天后皮肤泛红改善的代表性图像。可以看出，使用含灵芝源壳聚糖的样品后a*值和皮肤红区面积占比均显著降低，观察到红血丝、血管损伤及各种炎症等均有所改善，能有效改善皮肤泛红情况。

          ③.皮肤舒缓测试结果

          通过受试者自我评估，评估使用产品前后皮肤刺激状态的改善，来验证产品的舒缓功效。乳酸刺痛试验结果总分3，说明受试者为敏感皮肤人群。如图6 所示，在使用含灵芝源壳聚糖的样品乳酸造模后和使用产品后即刻后对比，受试者自评瘙痒、刺痛、灼热感均有显著好转，改善率分别为75.61%、82.31%、77.67%。试验说明含灵芝源壳聚糖的样品对敏感皮肤人群能起到较好的舒缓作用，能改善皮肤刺激敏感程度，具有舒缓功效。

          ④.皮肤敏感度测试结果

         皮肤敏感度测试仪是利用红细胞吸收的波长依赖性，首先将光束分成红光和绿光然后应用算法将绿光矩阵中的每一张图片元素的值从对应的红光矩阵的值中减去，最终输出的矩阵代表局部红细胞含量，用来监测皮肤血细胞含量的增加以评估和量化皮肤受刺激或敏感的程度。使用含灵芝源壳聚糖样品14、28 天后，皮肤敏感度参数与0 天相比有显著下降，下降率分别为5.04%、6.51%。从图7 中2 例受试者治疗前、治疗14、28 天后皮肤敏感度参数改善的代表性图像也能直观看到，进一步证实使用含灵芝源壳聚糖的样品能够有效改善皮肤敏感度，对维护皮肤健康、缓解皮肤敏感问题有着积极意义。

          灵芝源壳聚糖具有修复皮肤屏障、舒缓皮肤不适，以及对敏感性皮肤有改善作用。结合体内体外试验数据，推测灵芝壳聚通过有效抑制TNF-α 的分泌，降低过敏性炎症反应的作用，从而缓解皮肤泛红、瘙痒、刺痛等现象，降低皮肤敏感度。细胞划痕试验，表明灵芝源壳聚糖能缩短人皮肤成纤维细胞间隙闭合时间，显著促进细胞的迁移，起到维护表皮受损的修复作用，这标志着灵芝源壳聚糖可能在创面愈合及治疗与皮肤屏障受损相关的方面具有潜在应用价值。灵芝源壳聚糖在皮肤舒缓和修护领域具有巨大的应用潜力，有望为开发新型高效、安全的皮肤护理产品提供有力的理论依据和实践指导。